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馆藏清代牧牛图轴的微生物病害研究
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摘要：0 引 言 我国拥有卷帙浩繁的书画文物。这些书画文物是古代先人留给我们的极其珍贵的历史文化遗产，是中华民族宝贵的精神财富。书画文物流传至今，面临着酸氧老化、断裂脱浆、虫
0 引 言
我国拥有卷帙浩繁的书画文物。这些书画文物是古代先人留给我们的极其珍贵的历史文化遗产，是中华民族宝贵的精神财富。书画文物流传至今，面临着酸氧老化、断裂脱浆、虫蛀霉烂，岌岌可危。其中，微生物损害是书画文物中较为常见的病害。微生物具有分布广、对环境适应能力强、代谢转换能力强、繁殖速度快等特点，且在一开始生长的阶段很难发现，但当被发现时已经蔓延扩散。组成书画文物的材料——纸张、绢丝及浆糊等也都是微生物喜好的养料。所以，书画文物更容易受微生物的侵染。
近年来，微生物技术已经出现在文物保护中，在壁画、纸质文物、木质文物等方面取得了一定的研究成果[1-4]。这些技术为文物保护开辟了一个全新的领域，如今文物保护微生物学作为一门独立的学科出现在学术界[5]。利用这些新技术可以研究损害文物的微生物的种类，微生物对壁画、纸质、木质类文物材质的降解机理，从而为文物的保存及除霉工作提供技术指导。书画文物受到微生物侵染后，会留下微生物滋生的痕迹，出现黑色、黄色、红色等斑点，轻则损坏纸张部分纤维，重则使文物腐烂。早在20世纪30年代，人们就注意到纸质文物上出现的黄色、黄褐色、铁锈色的斑点，称之为狐斑(fox spots)[6]。目前，关于狐斑的成因，有些研究者更倾向于“生物论”的观点，即认为狐斑的成因主要可能与某种或某几种真菌的生长有关[7-8]。Arai[9]从不同纸张的褐色斑点(狐斑)处分离得到25株真菌，并认为这些斑点的形成与高温、高湿的环境相关，Corte等[10]也从地图的狐斑样品中分离得到真菌，并揭示了其与环境的相关性。
为全面了解馆藏书画文物的微生物病害信息，该研究工作包括了以下内容：对淮安楚州博物馆旧藏《牧牛图》轴的画芯和镶料及褙纸等处出现的微生物损害展开调查；对《牧牛图》轴上的黑色污斑和红色污斑处的微生物进行培养、分离纯化及鉴定。该项工作通过对这些污斑的分析检测探讨了微生物的损害机理，可为后续馆藏书画文物的预防性保护工作提供依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1书画样品 书画样品来自于《牧牛图》轴。《牧牛图》轴为淮安楚州博物馆旧藏，其画芯、镶料和褙纸等处出现严重的污渍和微生物损害。现场调研时发现该图轴存放的库房中无温湿度控制系统、密集柜内也未做防霉处理，致使本体材料出现多处变色，现状照片见图1。淮安为国家级历史名城，该画作对于研究清代淮安地区的民俗、民风具有重要的意义。
图1《牧牛图》轴病害现状 status ofMuNiuTu
1.1.2培养基制备 牛肉膏蛋白胨培养基：依次称取蛋白胨10 g、氯化钠10 g、酵母膏5 g、琼脂15 g于烧杯中，加入适量的水并加热使其溶解，后定容至1 000 mL，调pH值至7.4～7.6，1×105Pa灭菌30 min。液体培养基与固体培养基的成分相同，但不加琼脂。
马铃薯葡萄糖培养基：去皮马铃薯200 g，加适量的水煮沸30 min后，用八层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖20 g、琼脂15 g，后定容至1 000 mL，自然pH值，1×105Pa灭菌30 min。液体培养基与固体培养基的成分相同，但不加琼脂。
1.1.3试剂及主要设备 基因组提取采用北京百泰克生物科技有限公司基因组DNA提取试剂盒。聚合酶链式反应(PCR)扩增引物：细菌为24F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’)、真菌为ITS1(5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)和ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)，Taq DNA聚合酶，缓冲液体系(Green PCR试剂)均由南京金斯瑞公司提供。基因序列测定委托苏州金唯智生物科技有限公司。
PCR仪为德国Biometra公司2720型；凝胶成像系统为美国Bio-Rad公司170-8170型；电泳仪为北京市六一仪器厂DYY-6C型；酸碱度测试计为美国CLEAN仪器pH30型；微波水分仪为德国ABB公司L&W 862型；扫描电子显微镜为日本日立公司S-3400N型。
1.2 实验方法
1.2.1书画本体分析检测 采用酸碱度测试计在样本上选择4点进行测试。采用微波水分仪测试样本的含水率。采用扫描电子显微镜(SEM)观察样本污渍处的显微形貌。
1.2.2样品的采集 用无菌棉签在样品污斑处(黑色污斑处为Sample 1，红色污斑处为Sample 2)轻轻摩擦，后置于无菌水中，震荡混匀。分别取混匀液100 μL接种于适宜微生物生长的无菌牛肉膏蛋白胨和马铃薯葡萄糖固体培养基上。
1.2.3微生物的分离和纯化 将接种完的牛肉膏蛋白胨和马铃薯葡萄糖固体培养基置于恒温培养箱中，分别于37 ℃和28 ℃条件下培养，期间陆续在培养基上得到菌落。随后，采用平板划线法，接种换取样于新的培养基中，重复纯化3次，最终为单菌落。
文章来源：《文物鉴定与鉴赏》 网址: http://www.wwjdyjs.cn/qikandaodu/2021/0708/724.html
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